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《化妆品卫生规范》(2007年版)金黄色葡萄球菌检验

发布时间:2014-10-24      浏览次数:8973    分享:

1  范围 本规范规定了化妆品微生物学检验的基本要求。

北京11选5计划本规范适用于化妆品样品的采集、保存及供检样品制备。

2  仪器和设备

2.1 天平。

2.2 高压灭菌器。

2。3 振荡器。

2.4 三角瓶,250mL。

2.5 玻璃珠。

2.6 玻璃棒。

2.7 刻度吸管,1mL、10mL。

2。8 研钵或均质器。

2.9 恒温水浴箱。

北京11选5计划3  培养基和试剂

3。1 生理盐水

成分:

氯化钠       8.5g
蒸馏水加至1000mL

溶解后,分装到加玻璃珠的三角瓶内,每瓶  90mL,103。43kPa(121℃  15  lb)20min

北京11选5计划高压灭菌。

3.2 SCDLP 液体培养基

成分:

酪蛋白胨 17g 
大豆蛋白胨 3g 
氯化钠 5g 
磷酸氢二钾 2.5g 
葡萄糖         2.5g 
卵磷脂 1g 
吐温  80 7g 
蒸馏水 1000mL 

制法:先将卵磷脂在少量蒸馏水中加温溶解后,再与其它成分混合,加热溶解,调 pH

北京11选5计划为 7.2~7.3 分装,103.43kPa(121℃  15  lb)20min 高压灭菌。注意振荡,使沉淀于底层的 吐温 80 充分混合,冷却至 25℃左右使用。

注:如无酪蛋白胨和大豆蛋白胨,也可用多胨代替。

3.3 灭菌液体石蜡。

3。4 灭菌吐温 80。

北京11选5计划3.5 7.5%的氯化钠肉汤

成分:

蛋白胨 10g 
牛肉膏 3g 
氯化钠 75g 
蒸馏水加至 1000mL 

制法:将上述成分加热溶解,调 pH 为 7.4,分装,103.43kPa(121℃  15  lb)15min 高 压灭菌。

北京11选5计划3。6 Baird Parker 平板

成分:

胰蛋白胨 10g 
牛肉膏 5g 
酵母浸膏 1g 
丙酮酸钠 10g 
甘氨酸 12g 
氯化锂(LiCl·6H2O) 5g 
琼脂 20g 
蒸馏水 950mL 

pH7.0±0.2

增菌剂的配制:30%卵黄盐水 50mL 与除菌过滤的 1%亚碲酸钾溶液 10mL 混合,保存 于冰箱内。

制法:将各成分加到蒸馏水中,加热煮沸完全溶解,冷至  25℃±1℃校正  pH。分装每瓶 95mL,103.43kPa(121℃  15 lb)高压灭菌 15min。临用时加热溶化琼脂,每 95mL 加入 预热至 50℃左右的卵黄亚碲酸钾增菌剂 5mL,摇匀后倾注平板。培养基应是致密不透明的。 使用前在冰箱贮存不得超过 48h±2h。

3.7 血琼脂培养基

成分:

营养琼脂 100mL 
脱纤维羊血(或兔血) 10mL

制法:将营养琼脂加热融化,待冷至  50℃左右无菌操作加入脱纤维羊血,摇匀,制成 平板,置冰箱内备用。

3.8 甘露醇发酵培养基

成分:

蛋白胨 10g 
氯化钠 5g 
甘露醇 10g 
牛肉膏 5g 
0.2%麝香草酚蓝溶液 12mL 
蒸馏水 1000mL

制法:将蛋白胨、氯化钠、牛肉膏加到蒸馏水中,加热溶解,调 pH7.4,加入甘露醇和 指示剂,混匀后分装试管中,68.95kPa(115℃  10 lb)20min 灭菌备用。

3.9 兔(人)血浆制备

取 3。8%柠檬酸钠溶液,103。43kPa(121℃  15  lb)30min 高压灭菌,1 份加兔(人)全血 4 份,混匀静置;2000rpm~3000rpm 离心 3min~5min。血球下沉,取上面血浆。

北京11选5计划4  样品的采集及注意事项

4。1 所采集的样品,应具有代表性,一般视每批化妆品数量大小,随机抽取相应数量的包装单位。检验时,应分别从两个包装单位以上的样品中共取 10g 或 10mL。包装量小于 20g

的样品,采样量可适当增加样品包装数量。

4.2 供检验样品,应严格保持原有的包装状态。容器不应有破裂,在检验前不得打开,防 止样品被污染。

北京11选5计划4.3 接到样品后,应立即登记,编写检验序号,并按检验要求尽快检验。如不能及时检验, 样品应放在室温阴凉干燥处,不要冷藏或冷冻。

4。4 若只有一个样品而同时需做多种分析,如细菌、毒理、化学等,则宜先取出部分样品 做细菌检验,再将剩余样品做其它分析。

4.5 在检验过程中,从打开包装到全部检验操作结束,均须防止微生物的再污染和扩散, 所用器皿及材料均应事先灭菌,全部操作应在无菌室内进行,或在相应条件下,按无菌操作 规定进行。

4.6 如检出粪大肠菌群或其它致病菌,自报告发出之日起该菌种及被检样品应保存一个月。

北京11选5计划5  供检样品的制备

5。1 液体样品

5。1。1水溶性的液体样品,可量取 10mL 加到 90mL 灭菌生理盐水中,如样品少于 10mL, 仍按 10 倍稀释法进行。如为 5mL 则加到 45mL 灭菌生理盐水,混匀后,制成 1:10 检液。

5.1.2油性液体样品,取样品 10mL,先加 5mL 灭菌液体石蜡混匀,再加 10mL灭菌的吐

温 80,在 40℃~44℃水浴中振荡混合 10min,加入灭菌的生理盐水 75mL(在 40℃~44℃ 水浴中预温),在 40℃~44℃水浴中乳化,制成 1:10 的悬液。

5.2 膏、霜、乳剂半固体状样品

5.2.1亲水性的样品:称取10g,加到装有玻璃珠及 90mL灭菌生理盐水的三角瓶中,充分 振荡混匀,静置 15min。用其上清液作为 1:10 的检液。

5.2.2疏水性样品:称取10g,放到灭菌的研钵中,加 10mL 灭菌液体石蜡,研磨成粘稠状, 再加入 10mL 灭菌吐温 80,研磨待溶解后,加 70mL 灭菌生理盐水,在40℃~44℃水浴中 充分混合,制成 1:10 检液。

5.3 固体样品

称取 10g,加到 90mL 灭菌生理盐水中,充分振荡混匀,使其分散混悬,静置后,取上 清液作为 1:10 的检液。

如有均质器,上述水溶性膏、霜、粉剂等,可称  10g  样品加入  90mL灭菌生理盐水, 均质 1min~2min;疏水性膏、霜及眉笔、口红等,称 10g 样品,加 10mL灭菌液体石蜡,

10mL 吐温 80,70mL 灭菌生理盐水,均质 3min~5min。

6  操作步骤

6。1 增菌:取 1:10 稀释的样品接种到 90mL SCDLP 液体培养基中,置36℃±1℃培养箱, 培养 24h±2h。

注:如无此培养基也可用 7.5%氯化钠肉汤。

6.2    分离:自上述增菌培养液中,取 1~2  接种环,划线接种在Baird Parker 氏培养基,如 无此培养基也可划线接种到血琼脂平板,置36℃±1℃培养 24h~48h。在血琼脂平板上菌落 呈金黄色,大而突起,圆形,不透明,表面光滑,周围有溶血圈。在 Baird Parker 氏培养基 上为圆形,光滑,凸起,湿润,直径为  2mm~3mm,颜色呈灰色到黑色,边缘为淡色,周 围为一混浊带,在其外层有一透明带。用接种针接触菌落似有奶油树胶的软度。偶然会遇到 非脂肪溶解的类似菌落,但无混浊带及透明带。挑取单个菌落分纯在血琼脂平板上,置  36℃±1℃培养 24h±2h。

北京11选5计划6。3 染色镜检:挑取分纯菌落,涂片,进行革兰氏染色,镜检。金黄色葡萄球菌为革兰氏 阳性菌,排列成葡萄状,无芽胞,无夹膜,致病性葡萄球菌,菌体较小,直径约为 0。5m~1m。

6.4 甘露醇发酵试验:取上述分纯菌落接种到甘露醇发酵培养基中,在培养基液面上加入2mm~3mm的灭菌液体石蜡,置36℃±1℃培养 24h±2h,金黄色葡萄球菌应能发酵甘露醇 产酸。

北京11选5计划5.5 血浆凝固酶试验:吸取 1:4 新鲜血浆 0.5mL,放入灭菌小试管中,加入待检菌 24h±2h 肉汤培养物 0.5mL。混匀,放36℃±1℃恒温箱或恒温水浴中,每半小时观察一次,6h 之内 如呈现凝块即为阳性。同时以已知血浆凝固酶阳性和阴性菌株肉汤培养物及肉汤培养基各0.5mL,分别加入灭菌 1:4 血浆 0.5mL,混匀,作为对照。

6  检验结果报告 凡在上述选择平板上有可疑菌落生长,经染色镜检,证明为革兰氏阳性葡萄球菌,并能

发酵甘露醇产酸,血浆凝固酶试验阳性者,可报告被检样品检出金黄色葡萄球菌。

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图1:《化妆品卫生规范》(2007年版)金黄色葡萄球菌检验流程图

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